Современные методы диагностики хелибактериозной инфекции

Хеликобактериоз — инфекционное заболевание, которое вызывает бактерия Helicobacter pylori. С этим микроорганизмом ассоциируют хронический гастрит, язвенную болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, рак желудка. Средняя распространенность Helicobacter pylori у взрослых по всему миру составляет около 50% с наиболее высоким уровнем распространения в развивающихся странах (80—90%) и более низким уровнем в Западной Европе (30—50%), Северной Америке (30—40%) и Австралии (20%). По статистике, бактерия Helicobacter pylori есть у 65–92% взрослого населения России. По данным ГБУЗ «Московский клинический научно-практический центр им. А.С. Логинова ДЗМ», распространенность этой инфекции в Москве составляет 60,7–88%, в Санкт-Петербурге - 63,6%, в Восточной Сибири достигает 80-90%*. Данное заболевание все чаще выявляется у людей молодого трудоспособного возраста.

 Между тем, имеются научные доказательства связи инфекции с хроническим гастритом, язвенной болезнью желудка и 12-перстной кишки, злокачественными опухолями желудка. Элиминация Helicobacter pylori приводит к излечению гастрита и является профилактикой осложнений, рецидива или релокации болезни. Helicobacter pylori признан канцерогеном первого порядка, но при этом не является облигатным патогеном, то есть инфицирование не всегда сопровождается развитием заболевания.

Современные подходы к диагностике инфекции хелибактериоза включают широкий спектр различных тестов. У каждого из них есть свои особенности, которые могут влиять на точность полученных результатов исследования.

Рассмотрим некоторые из них.

Гистологический метод (микроскопия биоптата)

• Морфологически другие бактерии могут быть ошибочно распознаны как Helicobacter pylori, что может привезти к постановке неверного диагноза.
• Точность метода может зависеть от количества биоптатов и места их забора, ведь бактерии Helicobacter pylori могут быть неравномерно распределены по слизистой оболочке желудка.

Быстрый уреазный тест

Фрагмент слизистой оболочки желудка, полученный при биопсии, помещают в специальный раствор с индикаторным красителем. Если Helicobacter pylori обнаруживается, то за счет продуцируемой уреазы раствор изменит цвет на малиновый. 

·       Ложноположительные результаты редки, но вероятны, так как в желудке могут быть другие бактерии, способные вырабатывать уреазу и окрашивать тестовый раствор.

• Ложноотрицательный результат может возникать вследствие малой степени обсемененности слизистой оболочки желудка Helicobacter pylori, то есть на ранней стадии заболевания данный метод не достоверен.

Серологический метод (наличие антител к Helicobacter pylori в крови)

• Данный метод малоинформативен для пациентов со слабым иммунным ответом или на ранней стадии заболевания, так как антитела появляются не ранее, чем через месяц после инфицирования.
• Несмотря на то, что уровень антител в процессе лечения падает, серологическая реакция остается положительной долгое время, поэтому серологический метод нельзя использовать для выявления эффективности терапии.

Анализ кала на антиген Helicobacter pylori

• Довольно  точный  метод, но при запорах может  разрушаться  оболочка Helicobacter pylori, а это, в свою очередь, приводит к недостоверным результатам исследования.

13С-уреазный дыхательный тест

• Ложноотрицательные результаты редки, но могут встречаться у пациентов, перенесших резекцию желудка, а также при значительном снижении секреции желудка, а также при малой степени обсемененности слизистой оболочки желудка Helicobacter pylori.
• При этом ложноположительные результаты могут провоцироваться расщеплением мочевины другими бактериями, находящимися во рту, или бактериями, содержащими уреазу, в желудке.

Молекулярно-генетический метод (ПЦР) 

Метод предназначен для обнаружения ДНК Helicobacter pylori в различных биологических образцах: биоптаты слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, кал, слюна. Преимущества метода ПЦР заключаются в точности и чувствительности исследования, позволяющие обнаружить ДНК микроорганизмов, даже если их очень мало, а также высокой скорости получения результата.

Кроме того, ПЦР позволяет оценить генотипические и фенотипические характеристики возбудителя. Почти у каждого пациента имеется уникальный штамм Helicobacter pylori. Выявлено, что вирулентность Helicobacter pylori во многом обусловливает клинические проявления инфекции. Существует ряд генов, продукты которых – белки Cag A, Vac A, Ice A, Bab A – являются факторами патогенности.

·       Уникальность метода состоит в высокой чувствительности и специфичности выявления возбудителя.

·       Разнообразие анализируемых материалов позволяет диагностировать инфекцию как инвазивным, так и неинвазивным методом.

Для повышения точности диагностики этой инфекции рекомендуется проводить комплексное тестирование, включающее несколько методов исследования.

Специалисты компании «ТестГен» разработали набор реагентов для качественного определения ДНК Helicobacter pylori методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме реального времени «HP-тест».

Эта тест-система рассчитана для исследования клинического материала (биоптаты слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, кал, слюна) у пациентов с подозрением на хеликобактериоз вне зависимости от формы и стадии заболевания для всех групп населения.

Технические характеристики набора «HP-тест» от компании «ТестГен»:

Адаптирован под приборы: CFX96, ДТпрайм, Rotor-Gene Q, QuantStudio 5, FLUORITE.

Каждый набор содержит реагенты, рассчитанные на проведение 96 реакций, что соответствует определению 94 исследуемых образцов, отрицательного и положительного контрольных образцов при массовых исследованиях или 32 единичным постановкам исследуемых образцов с отрицательными и положительными контрольными образцами в каждой постановке.

Аналитическая чувствительность: 439 – 467 копий/мл.

Чувствительность (в процентах):

·       Биоптаты слизистой оболочки желудка – 100%.

·       Биоптаты двенадцатиперстной кишки – 100%.

·       Кал – 92,86%

·       Слюна – 81,82%.

Специфичен по отношению к ДНК Helicobacter pylori.

Время проведения исследования - около 1 часа (на разных моделях амплификаторов время анализа различается).

Продукт «ТестГен» для диагностики хелибактериоза обладает следующими преимуществами:

1.     По сравнению с другими методами диагностики, ПЦР - более чувствительный и специфичный метод, защищенный от ложноположительных результатов.

2.     «HP-тест» позволяет диагностировать хеликобактериозную инфекцию у пациентов вне зависимости от формы и стадии заболевания. 

3.     Наличие фермента урацил-ДНК-гликозилазы препятствует получению ложноположительных результатов при контаминации.

4.     Разнообразие биологических материалов для проб позволяет использовать инвазивную и неинвазивную методику. Неинвазивные методы более щадящие и комфортные для пациента.

5.     Протокол амплификации длится всего 60 минут.

Как следует из вышеуказанных данных, ни один метод диагностики Helicobacter pylori нельзя считать универсальным в 100% ситуаций. Каждый метод исследования хеликобактериоза имеет свои преимущества и недостатки, методы различаются по чувствительности и специфичности. В ходе многочисленных сравнительных исследований выявлено, что результаты разных методов не всегда идентичны. Значит, во избежание получения ложноотрицательных или ложноположительных результатов необходимо использовать как минимум два метода и результат считать достоверным при совпадении показателей обоих методов исследования. Некоторые авторы рекомендуют даже использование трех методов для того, чтобы говорить об отсутствии инфекции.

Подводя итоги, хочется отметить, что тест-система «HP-тест» от компании «ТестГен» – это удобный, быстрый метод получения достоверных данных как для диагностики хеликобактериоза, так и для определения эффективности лечения. Рекомендуется применять в составе комплексного тестирования пациентов.

Источники:

1. *Бордин Д. С., Эмбутниекс Ю. В., Хомерики С. Г., Войнован И. Н. Методы диагностики инфекции Helicobacter pylori// Методические рекомендации. 2019, стр. 5

2.     https://mosgorzdrav.ru/ru-RU/science/default/download/508.html

3.     https://medvedev.ru/articles/gastroenterologiya/nelicobacter-pylori/